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本试剂盒用简便快速的方法可以从各种植物样本中提取内质网膜蛋白，提取过程简单方便，可在一小时内提取得到高质量的内质网膜蛋白。本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白样本含高浓度盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（HR0389）。

本试剂盒采用非酶法提取，提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，但蛋白回收率和纯度相比酶法较低。酶法提取的蛋白纯度高，保持天然活性，而且绝少交叉污染，但是耗时较长。如需更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可选择酶法提取试剂盒（HR8061）。

• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

• 取1g新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。
  
• 加入2mL提取液A后用匀浆机充分匀浆或者加适量提取液A后用Dounce匀浆器充分匀浆。
  注：
  ● 培养细胞直接收集细胞后用Dounce匀浆器匀浆即可，匀浆后加提取液混匀后直接进行后续离心。
  ● 没有Dounce匀浆器也可置于研钵用液氮研磨，研磨后假如提取液A。
  ● 没有液氮研磨条件也可加入提取液A后直接置冰上研磨。
  
• 将匀浆用100μm细胞筛过滤；
  注：
  ● 没有细胞筛网的话可以将滤液静置片刻，让大的组织块自然沉降，收集细胞上清。
  ● 如果匀浆液较粘稠，不好吸取，可以将吸头尖剪掉一点。
  
• 将滤液置振荡器轻微振荡20～30分钟。
  
• 将滤液700×g离心10分钟。取上清。
  
• 将上清20000×g力离心10分钟。弃沉淀，取上清。
  
• 将上清30000～50000×g离心20分钟。
  注：如果条件允许，可将离心力加大到100000×g，有利于回收光面内质网小泡。
  
• 弃上清，在沉淀中加入500μL提取液B和2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后4℃条件振荡1小时。
  
• 在4℃，10000×g条件下离心5分钟，取上清。
  
• 在37℃水浴10分钟。
  
• 在37℃ 800～1000×g离心2分钟。
  
• 此时溶液分为两层，小心移除上层，保留下层溶液，大约50μL液体。
  注：下层为粘稠状液体。
  
• 用50～150μL膜蛋白溶解液溶解下层溶液，即得内质网膜蛋白。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  膜蛋白丰度比较低，需要足够的植物样品上样量才能提高蛋白浓度。也可能第8步处理时，部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂B
  的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。